1、培養基配制：猴頭菇菌絲在25℃左右生長良好，在南方稍做溫控，周年均可生產。常用的培養基配方為：①闊葉木屑78％、麥麩20％；②棉籽殼98％、石膏1％，白糖1％。
配制時，將白糖先溶于水，其他原料拌勻，邊拌邊加水，糖液也加入，使其含水量達到50％-60％，手捏料時不滴水為宜，培養料配好后即可裝袋。
2、裝袋：袋可用聚乙烯塑料袋，大小規格17×28×0.05厘米為宜。裝料時不要松裝，要不斷振動、壓實，裝至距袋口10厘米左右處，用大頭粗2厘米，一端尖頭圓木棍，棍子上端套上一個口徑為3厘米的聚丙烯頸圈，將袋口折回，用橡皮筋扎在頸圈上，用雙層牛皮紙包住袋口和棉塞（防止滅菌時受潮）然后進行滅菌。
3、滅菌和接種：聚乙烯袋在常壓滅菌6小時到8小時（土蒸鍋）冷卻后接種，接種時在無菌箱內酒精燈火焰上方。挑取蠶豆大小猴頭菌種一塊，接到已滅過菌的培養袋內，然后塞好棉塞。
4、培養：接種后將培養袋置在20℃-25℃條件下培養30-40天，菌絲即可長滿全袋，形成菌膜。室內濕度保持在80％-90％，可通過地面潑水，空間噴霧來調節濕度，保持室內空氣新鮮，有散光射入，10-15天，就可培育出50-100克/袋鮮猴頭，可采猴頭2-3次，每袋可產猴頭100-200克。
